B、 3个实验方案

外植体压缩实验

设备清单：

第一天

培养基：2瓶80ml，DMEM，火腿F-12，FBS，Penn/Strep，100-1000微升移液管和针头，

解剖工具（无菌）：带2个额外刀片的手术刀、镊子、止血器、滴布、PBS、培养皿

外植工具：真皮冲孔器（3）、Plexiglas板、艾伦扳手、切片机、剃刀、镊子、微板、介质、移液管/尖端、手术刀W /刀片、96孔板

第2天

四。压缩装置：框架w/杆、2个艾伦扳手、6孔盘、柱塞、盖、100-1000微升移液管和尖端、培养基、镊子、回形针、培养皿、天平

第3天

5个。后压缩：24孔微孔板，镊子手术刀，框架，后压缩介质，100-1000微升移液管和针头

A、 高压灭菌器

按照高压灭菌器协议尽可能多地对设备进行高压灭菌器灭菌。

用75%异丙醇的喷雾瓶对培养罩内部进行消毒并擦拭干净。

用酒精喷洒并放置在培养罩内，对剩余设备进行消毒。

B、 使生长和流动介质

生长培养基：44.5%DMEM/F-12，10%FBS，1%Penn/Strep

完成后。培养基：48.5%DMEM/F-12，2%FBS，1%Penn/Strep

将所有成分放入37°C水浴中约15分钟。

培养罩中的混合培养基：每只动物20毫升生长培养基和40毫升合成后培养基。每只动物的培养基

与任何纸巾一起使用前，确保培养基温度为37°C。

C、 解剖和外植体切除

仅使用消毒工具在培养罩内解剖新鲜猪膝。

使用清洁手术刀和镊子去除内侧和外侧半月板，并将其放入含有无菌磷酸盐缓冲生理盐水1X（PBS）的盘中

去除外植体半月板在洁净表面（有机玻璃）

从每个半月板上取下6个外部和6个内部外植体：

将锋利的真皮冲头平放在半月板的顶面上，并用旋转运动切割。

使用艾伦扳手将纸巾从冲头推入切片机。

使用剃刀和锯切运动，修剪外植体去除尽可能少的顶面。

用镊子从切片机上取下。

放置在96孔微孔板中，保持顶部表面朝上。

用约300微升的生长介质填充油井。

贴上标签并放置在培养箱中48小时

24小时后。用移液管移走旧的培养基，再注入新的生长培养基。

D、 压缩试验

在PC机上，打开桌面上的“骨髓”文件夹，双击SmartMotor界面图标。

转到文件-->打开并从C:程序文件/程序编辑器中选择压缩程序

以下位移控制文件可供使用：5%disp.sms；10%disp.sms；15%disp。短信；20%显示短信

负载控制程序为：.1Mpa.sms；.5Mpa.sms；1Mpa.sms

确保j等于所需的循环次数，u等于所需的位移。

打开电机（打开电脑顶部电源设备的开关），然后单击工具栏上的T按钮发送程序。

通过右下角（通道刻度盘下方）的开关打开2100系统电源：

增益应设置为200x，刻度盘为1.35

通道选择器应该在通道2上。

通道2上的激子开关应打开。

电桥电压表上的电压读数应为10伏。

有关帮助，请使用2100系统手册。

加载样本后，测试现在可以运行了。

装载样品

确保完成后。介质温度为37°C

将框架、盘子、柱塞、盖子和工具放入培养罩并消毒。

将组件组装到框架中（如图1所示），并将外植体放在每个井口的中心。

保持每口井外植体的整齐。一号井是两边都有对准孔的井。

降低柱塞，使其与外植体接触，用艾伦扳手将盖子悬挂在上方。

用移液管将400微升流动介质注入每口井

下盖，从框架上取下，并将其带到生物反应器中，使其保持水平和稳定，以防止从井中溢出。

先装上底销，然后手动降下执行器，使其与顶孔匹配并装上顶销。

转动2100系统通道2上的平衡旋钮，直到两个灯（通道2顶部）熄灭。

单击工具栏上的R按钮运行测试。

测试完成后，拆下顶销，升起执行器（D=70000），并在将其带回培养罩之前拆下下下销。

根据需要取出样品和介质，并用后压缩机放置在24孔板中。媒体（2%FBS）。

外植体需要用镊子和手术刀切成浅层和深层

称量每半个外植体的重量（将秤放在培养箱中），并将其分别放入24孔板中。

每口井加入1毫升流动介质。

放入有二氧化碳供应的培养箱。

培养24小时。

孵育时间结束后，立即将培养基和组织样本分离，放入干净的、贴上标签的1.5毫升离心管中，并立即放在冰上。

立即将样品送至-80°C冰箱。将培养基样品直接放入冰箱。组织样本必须在液氮罐中冷冻24小时后才能放入冰箱。

测试数据：

将光标放在智能马达命令wi中数据串的底部